PRUEBA PARA VIH  HIV-1/2

Nombre y finalidad de uso:

Abbot determine HIV-1/2 es un inmunoanalisis cualitativo invitro de lectura visual para la detección de anticuerpos frente a los virus VIH-1 y VIH-2 en suero, plasma o sangre.

La muestra se añade en la superficie absorbente, mientras la muestra pasa el área del conjugado, lo reconstituye y se muestra con el conjugado de coloide de selenio-antígenos. Esta mezcla se mueve por la fase solida hasta llegar a los antígenos recombinantes y péptidos sintéticos inmovilizados en la ventana de resultados del paciente.

Procedimiento del ensayo.

1.      Retire el plastico de protección de los ensayos

2.      Para muestras de suero o plasma

a)      Dispense 50 micro litros de muestra (con una pipeta de precisión) en la superficie absorbente (señalada con una flecha)

b)     Espere  entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado

3.      Para muestras de sangre (venopuncion)

a)      Dispense 50 microlitros de muestra (con una pipeta de precisión) en la superficie absorbente (señalada con una flecha)

b)     Espere un minuto y dispense una  gota de tampón de arrastre en la superficie absorbente

c)      espere entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado

4.      para muestras de sangre (punción digital)

a)      Dispense 50 microlitros de muestra (con un tubo capilar de EDTA) en la superficie absorbente  (señalada con una flecha)

b)     Espere hasta que la sangre impregne totalmente la superficie absorbente y a continuación, dispense una gota de tampón de arrastre en la superficie absorbente.

c)      Espere  entre un mínimo de 15 minutos y un máximo de 60 minutos para leer el resultado

Interpretación de resultados:

Positivo (2barras): tanto en la ventana de control como en la ventana de resultados del paciente aparecen barras rojas. Cualquier tipo de tonalidad roja que pueda aparecer en la ventana de resultados del paciente indica que el resultado es positivo

Negativo (1 barra): en la  ventana de control aparece un abarra roja y en la ventana de resultados del paciente no aparece nada.

No valido (ninguna barra): si no aparece una barra en la ventana de control del ensayo, aunque haya aparecido una ventana roja en el de resultados del paciente .

·         El resultado del ensyo es positivo aunque el tono de la barra de ventana de resultados sea mas claro o mas obsuro que el de barra de control

·         Si obtiene repetidamente un resultado no valido.

resultado: fue positivo.

Prueba de rumpel-lee.

Introducción:

Consiste en someter el antebrazo del paciente a una presión intermedia entre la sistólica y la diastólica durante 5 minutos. Tras la retirada del manguito inflable del tensiómetro, como para medir la T.A.  y esperar a que la piel recupere su estado relajado se observa la zona presionada. El conteo de petequias producidas por la rotura capilar en un área de unos 10 cm² superior a 30 da positivo en el signo de Rumpel-Leede.

Normalmente no debe de producirse mas de 5 petequias por debajo de la comprensión, más de 10 petequias y sobre todo extendidas mas alla del cuarto superior del antebrazo es patológico.   

Tiene como finalidad determinar la fragilidad de las paredes capilares, estimar la tendencia a la hemorragia y ayuda a reconocer la trombocitopenia.

Valores Normales:

0-10 = 1+

10-20 = 2+

20-50 = 3+

50 o más petequias = 4+

Los valores aumentados pueden indicar coagulación intravascular difusa. disminución del fibrinogeno, disminución de la protombina, deficiencia del factor VII, trombocitopenia, tromboastenia, deficiencia de vitamina K. Y puede estar asociado a afecciones no relacionados con trastornos de coagulación como: escarlatina, hipertensión, diabetes, gripe, sarampión, escorbuto.

resultado: 3 petequias 

RETRACCIÓN DEL COAGULO

Objetivo:

 Al termino de la practica del alumno sera capaz de realizar e interpretar la prueba de R.C.

Introducción:

Puesto que el coagulo de fibrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre  (in vitro e in vivo) el volumen de glóbulos rojos establece el limite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normal los demás factores, el coagulo se retrae tanto mas cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al numero de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas la fibrina puede casi disolverse tan rápidamente como se forma, y la retracción del coagulo se modifica en los trastornos de este tipo: choque, quemaduras etc.

Mide la cantidad de fibrina formada y su retracción: así como el numero de función de las plaquetas, pues poseen una proteína similar a la actomiosina, que produce la retracción del coagulo.

Material:

Tubos de ensaye para centrifuga

Alambre de 1 mm de grosor

Baño maría de 37°C

Equipo de venopuncion

Técnica

1. Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5 ml, de sangre venosa recién obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.
2. Se pone el tubo en el alambre, de un baño de agua a 37° C en donde se deja 1 hr. Después de la formación del coagulo sin tocarlo.
3. Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurrir dentro del tubo el coagulo unido al alambre durante 1 a 2 min.
4. Se lee el volumen del liquido que quedo en el tubo. El resultado se expresa como un porcentaje del volumen inicial de 5 ml.

Ejemplo: Si después de la coagulación 5 ml, de sangre suministraron  3 ml, de liquido.

La retracción es de

3X100

_____= 60 %

    5 

Valores normales 

Entre 48 y 64 %

Resultado 

2X100

______=40%

     5

TIEMPO DE SANGRADO.

MÉTODO DE DUKE

OBJETIVO

Que al termino de la practica realice el tiempo de sangrado por cualquier de los dos métodos existentes.

INTRODUCCIÓN

Un tiempo de sangrado normal indica una retracción normal de los capilares y la existencia de un numero suficiente de plaquetas, con actividad normal.

La metamorfosis viscosa normal depende de un buen mecanismo extrinseco de producción de tromboplastina, por lo tanto, el tiempo de sangrado se alarga en la insuficiencia del factor  Vll. El tiempo de sangrado aumenta en forma caracteristica en la purpura  trombocitopenica.

MATERIAL

Lanceta estéril 

Torundas alcoholadas 

Reloj cronometro

Papel filtro

TÉCNICA

1.- Con una lanceta estéril, se practica en el borde inferior del lóbulo de la oreja una punción de 3mm. de profundidad. Se pone en marca el cronometro. El borde debe ser profundo, y no debe de abarcar venas visibles.

2.- A intervalos de medio minuto, se aplica cuidadosamente, sobre la gota de sangre el borde de un pequeño papel filtro, cuidando de no tocar la piel. Esta maniobra por objeto es impedir que se forme coagule la gota de sangre sobre la herida ,pues los tiempos de sangrado resultaran anormalmente bajos.

3.- Utilizando una nueva zona de papel filtro para cada secado de medio minuto, puede tener un registro conveniente del tiempo total (tiempo en minutos = numero de gotas divididas entre dos ) se toma como punto final al momento en el cual el papel filtro ya no absorbe sangre.

TIEMPO DE SANGRADO NORMAL CON EL MÉTODO DE DUKE:

De uno a tres minutos (si embargo, puedo ser a veces hasta cinco minutos en sujetos normales).

RESULTADO:

Método de DUKE 1:33 minutos.

MÉTODO DE IVY

TÉCNICA: 

1. Se coloca alrededor del brazo un manguito de esfindonometro con el cual se ejerce precio de 40 mm. De Hg. Que debe permanecer aquel durante toda la prueba.

2. Utilizando una lanceta estéril se hace a intervalos de cortos tres punciones (entre 2.5 y 3.0 mm de profundidad), a lo  largo de la cara flexora (interna) el antebrazo, evitando las venas visibles. Se pone en marcha el cronometro.

3.- A intervalos  de medio minuto , utilizando papel filtro se seca cuidadosamente cada gota de sangre en la misma forma que para el método  de DUKE, el punto final es el mismo.

TIEMPO NORMAL DE SANGRADO EN EL MÉTODO DE IVY.

ENTRE 2 Y 6 minutos (máximo de 7 minutos).

NOTA: el tiempo de sangrado representa sencilla y útil (aunque algo imprecisa) de la eficacia de las funciones capilares y de plaquetas  en la hemostasia. Es preferible el método de IVY al de DUKE,pues las condiciones son mas contantes y se realizan en realidad 3 pruebas.

RESULTADO:

Método de IVY 3:48 minutos.

ROSA DE BENGALA

ROSA DE BENGALA

INTRODUCCIÓN:

Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininas especificas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnostico temprano.

REACTIVOS:

Antígeno Rosa de Bengala

Control Positivo de Brucella 

Control Negativo de Brucella

MATERIAL:

Placa de prueba ( se recomienda que siempre se utilice una placa de vidrio para una mejor observación de los resultados).

Pipetas  desechables

El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 ul.

Se sugiere utilizar pipetas automáticas preferentemente.

Cronometro

Muestra.

PROCEDIMIENTO:

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo controles y muestras del suero.

2. Utilizando la pipeta automática adiciones 30ul de la muestra del paciente e un circulo de la placa.

3. Mezcle suavemente en Antígeno de Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo después coloque 30ul en la placa de prueba en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador( usar un aplicador diferente para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimiento rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado.

RESULTADO:

.No presento aglutinación.

EVIDENCIA:

PRÁCTICA DE VDRL - USR

Antígeno de cardiolipina para investigar reaginas de la sífilis en Suero sin inactivar, en Plasma y L. C. R. (no requiere reconstitución)

Agente de Diagnóstico

Introducción

Treponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis, una enfermedad que generalmente se transmite por vía sexual.

Su diagnóstico puede ser serológico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos:

1.    Tipo “cardiolipina”.- No treponema e inespecíficos

2.    Antitreponemas específicos

La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratoy VDRL se le conoce como una prueba para sífilis no-treponemica. Es parte de la exploración inicial de la sífilis e iniciar un tratamiento. Con  el método cualitativo empleando la  placa presenta floculación, si se presenta el caso se lleva a cabo el método cuantitativo con el o los sueros positivos.

También se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, así como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

Reactivos y material proporcionado

-Antígeno en suspensión  estabilizada (VDRL)

-Control positivo

-Control negativo

-AGUJA No. 21sin bisel

-Pipetas  desechables (únicamente para presentaciones de 100 pruebas)

Estabilidad y almacenamiento del reactivo

El antígeno VDRL y los Sueros Controles  son estables hasta su  fecha de caducidad indicada en la etiqueta cuando de almacena de 2° a 8° C   NO CONGELAR.

Material y equipo necesario no proporcionado.

-Placa cóncava (indispensable)

-Agitador Mecánico

-Cronometro

-Microscopio

Obtención de la muestra

 

- Obtener 3 ml. de sangre por punción venosa.

- Centrifugar y separar el suero.

Método cualitativo.

1. En un anillo de la placa cóncava  depositar 0.05 ml de suero problema.
2.  En anillos diferentes colocar una gota de suero control positivo y en otra por separado una gota de control negativo, extender sobre la superficie de los anillos
3.  Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado previamente resuspendido en cada una de las muestras utilizando la aguja  N.21 sin bisel.
4. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min. Las pruebas realizadas en un clima extremadamente seco puede provocar la evaporación de las muestras; por lo tanto la placa en rotación puede ser cubierta con una tapa de caja petri húmeda previamente con grasa.
5.    Leer inmediatamente al microscopio con objetivo y ocular 10X.

INTERPRETACIÓN

1. Control Positivo
   
   
    Presencia de floculación  mediana o grande.
   
   
   Control Negativo
   
   
   Ausencia de floculación.
   
      
   Método cuantitativo.
   1.      Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
   
   
   2.      Colocar en una gradilla 6 tubos  de 12 x 75 mm y numerarlos.
   
   
   3.      Agregar a cada uno 0.5 ml. de solución salina al 0. 9%.
   
   
   4.      Depositar 0.5 ml. de suero al tubo No.1 y mezclar.
   
   
   5.      Pasar 0.5 ml. del tubo No. 1 al tubo No.2 mezclar.
   
   
   6.      Pasar 0.5 ml. del tubo No.2 al tubo No. 3 mezclar.
   
   
   7.      Continuar con este proceso hasta el tubo 6.
   
   
   8.      Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa cóncava.
   
   
   9.      Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin bisel a cada una de las  diluciones.
   
   
   10.  Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min.
                                                                                                       
   11.  Leer al microscopio con objetivo y ocular 10x.
   
   
    Interpretación.
   
   
   El título del suero problema será la última dilución que presente un resultado positivo. Ejemplo:
   
   
   Si se presenta floculación hasta el tubo 3 – dilución 1:8, por lo tanto el título será 1:8.
   
   
   1.      Nota: 
   Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.
   2.      
   Sueros débiles positivos y fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de prozona.
   3.      
   Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 min. puede secarse la reacción y dificultad en la interpretación.
   4.      
   El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.
   
   
   
   
   
   
   Conclusión
   Esta práctica nos sirve para identificar la enfermedad de transmisión sexual sífilis es una técnica inmunológica rápida y sencilla de realizar.

RECUENTO DE PLAQUETAS

OBJETIVO

Que el alumno aprenda a contar correctamente las plaquetas.

INTRODUCCIÓN

Las plaquetas son los elementos formes mas pequeños de la sangre, actúan en la hemostasia y en el mantenimiento de la integridad vascular, además de participar en el proceso de la coagulación sanguínea.

Las plaquetas son difíciles de contar debido que son pequeñas y deben distinguirse de los restos celulares. Otra fuente de dificultad reside en su tendencia de adherirse al cristal, a cualquier cuerpo extraño y en particular unas de otras.

Para el conteo de plaquetas se utiliza oxalato de amonio como diluyente y se cuenta en los mismos cuadros para glóbulos rojos y el resultado se multiplica por 1000.

MATERIA Y REACTIVOS

·        Pipeta de thoma para glóbulos blancos

·        Microscopio

·        Cámara de Neubauer

·        Caja de petri con papel filtro

·        Oxalato de amonio al 1%

·        Sangre venosa con EDTA

PROCEDIMIENTO

1.    Mezclar la sangre perfectamente.

2.   Aspirar la muestra hasta la marca 0.5.

3.   Limpiar con gasa el exceso de sangre y aspirar oxalato de amonio hasta la marca 11.

4.   Mezclar de 3 a 5 min, desechar las 3 primeras gotas y llenar las cuadriculas de la cámara de Neubauer.

5.   Dejar sedimentar de 10 a 15 min. La cámara en una caja petri con un disco de papel filtro húmedo en el fondo para evitar la evaporación.

6.   Enfocar la cámara y contar las plaquetas en los mismos cuadros para glóbulos rojos empleando el objetivo 40X.

7.   Las plaquetas contadas se multiplican por 1000 para obtener el número de plaquetas por mm.

VALOR DE REFERENCIA

150 000 - 450 000 / mm3

RESULTADOS DE LAS MUESTRAS

1.    251 000

2.   358 000