lunes, 15 de septiembre de 2014



RECUENTO DE PLAQUETAS


OBJETIVO
Que el alumno aprenda a contar correctamente las plaquetas.


INTRODUCCIÓN

Las plaquetas son los elementos formes mas pequeños de la sangre, actúan en la hemostasia y en el mantenimiento de la integridad vascular, además de participar en el proceso de la coagulación sanguínea.
Las plaquetas son difíciles de contar debido que son pequeñas y deben distinguirse de los restos celulares. Otra fuente de dificultad reside en su tendencia de adherirse al cristal, a cualquier cuerpo extraño y en particular unas de otras.
Para el conteo de plaquetas se utiliza oxalato de amonio como diluyente y se cuenta en los mismos cuadros para glóbulos rojos y el resultado se multiplica por 1000.


MATERIA Y REACTIVOS

·        Pipeta de thoma para glóbulos blancos
·        Microscopio
·        Cámara de Neubauer
·        Caja de petri con papel filtro
·        Oxalato de amonio al 1%
·        Sangre venosa con EDTA

PROCEDIMIENTO
1.    Mezclar la sangre perfectamente.
2.   Aspirar la muestra hasta la marca 0.5.
3.   Limpiar con gasa el exceso de sangre y aspirar oxalato de amonio hasta la marca 11.
4.   Mezclar de 3 a 5 min, desechar las 3 primeras gotas y llenar las cuadriculas de la cámara de Neubauer.
5.   Dejar sedimentar de 10 a 15 min. La cámara en una caja petri con un disco de papel filtro húmedo en el fondo para evitar la evaporación.
6.   Enfocar la cámara y contar las plaquetas en los mismos cuadros para glóbulos rojos empleando el objetivo 40X.
7.   Las plaquetas contadas se multiplican por 1000 para obtener el número de plaquetas por mm.

VALOR DE REFERENCIA
150 000 - 450 000 / mm3

RESULTADOS DE LAS MUESTRAS
1.    251 000

2.   358 000







GRUPO SANGUÍNEO Y FACTOR Rh. 

DETERMINACIÓN DE AGLUTINÓGENOS (TIPADO GLOBULAR)

En la membrana del glóbulo rojo existen complejos químicos llamados antígenos que representan los llamados grupos de factores sanguíneos.
Se sabe que estos complejos químicos se han generado de una sustancia llamada precursora, llamada sustancia h (humana). Sobre esta sustancia se adhieren carbohidratos en un orden determinado. Para la sangre de tipo cero “O” se unen dos moléculas de galactosa, una de mucosa, una de glucosa y una de glucosamina.
Sobre esta cadena puede adherirse una nueva molécula y se cambia el tipo, si es de glucosamina se tiene el grupo “A” y si es de galactosa se tiene el grupo “B”. Si se unen ambas moléculas en diversa posición se tiene el grupo ab:
Los primeros grupos sanguíneos que se descubrieron fueron los llamados ABO y actualmente se conocen muchos más.
El sistema Rh es independiente del sistema ABO, pero igual de importante en la tipificación sanguínea.
Hay antígenos presentes en los eritrocitos de casi todas las personas y se les llama universales, otros antígenos se han concentrado en una sola familia y se les llama familiares y se han encontrado algunos otros  que pertenecen solamente a un individuo y se les llama personales.
La importancia de la determinación de los grupos sanguíneos y Rh en el laboratorio es en las transfusiones sanguíneas y en la eritroblastosis fetal.


FACTOR RH:

OBJETIVO.
El alumno determinara el grupo sanguíneo y el factor Rh de una muestra sanguínea, utilizando los antisueros correspondientes y previa demostración correctamente.

INTRODUCCIÓN.
Los grupos sanguíneos se han clasificado así por poseer características diferentes, estas características son los antígenos (aglutinógenos) y los anticuerpos (aglutininas) que son los responsables de las reacciones adversas inmunológicas en las transfusiones.

REACTIVOS.
  1. Suero anti A
  2. Suero anti B
  3. Suero anti D
  4. Sol. isotónica de NaCI al 0.9%


 MATERIAL.
  1. Equipo de extracción sanguínea
  2. 1 placa de virio escavada
  3. Aplicadores de madera (palillos)
  4. Lanceta estéril
  5. 8 tubos de ensaye 10x100
  6. Gradilla
  7. centrifuga


MÉTODO PARA PORTAOBJETOS O PLACA.
TÉCNICA.
Se utiliza la punción cutánea  por medio de la lanceta, se desecha la primera gota se deposita una gota en cada una de las excavaciones de la placa en forma horizontal y marcar con letras A, B, AB, y Rh posteriormente se añade una gota den suero Anti A, Anti B y Anti D respectivamente.



Mezclar perfectamente con un hisopo (aplicador) cada preparación (no contaminar las diferentes preparaciones)

Agitar suavemente la placa con movimientos circulares durante 30 segundos aproximadamente.



Anti A
Anti B
Anti D
El grupo sanguíneo y su factor Rh
+
-
+
A Rh positivo
+
-
-
A Rh negativo
-
+
+
B Rh positivo
-
+
-
B Rh negativo
+
+
+
AB Rh positivo
+
+
-
AB Rh negativo
-
-
+
O Rh positivo
-
-
-
O Rh negativo

En donde (+) existencia de aglutinación.
En donde (-) ausencia de aglutinación.



 RESULTADOS.

                MUESTRA 1
         B Rh + (B Rh positivo)



                     MUESTRA 2
            O Rh + (O Rh positivo)









MÉTODO DE TUBO DE ENSAYE.

TÉCNICA.
Previa asepsia practicar veno punción y recoger 1ml. De sangre.

Depositar en un tubo de ensaye .2ml. de sangre y 4.9 ml. De sol. Isotónica de NaCI al 0.9% para formar una suspensión de eritrocitos al 2%

Marcar 3 tubos de ensaye con las letras A, B, Rh respectivamente depositar en el tubo “A” una gota de suero Anti-A, en el tubo “B” una gota de suero Anti-B y en el tubo “Rh” una gota de suero Anti-D.
Añadir a cada tubo una gota de suspensión de eritrocitos al 2%(preparadas con anterioridad).

Centrifugar a 1,000 r.p.m. durante un minuto.

Sacar los tubos e inmediatamente observar si existe aglutinación.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Si existe aglutinación en el tubo “A” la sangre es del tipo “A”                                       
Si existe aglutinación en el tubo “B” la sangre es del tipo “B”
Si existe aglutinación en los tubos A y B la sangre es del tipo “AB”
Si no existe aglutinación en los tubos A y B la sangre es del tipo “O”
Si existe aglutinación en el tubo Rh la sangre será de factor Rh positivo
Si no existe aglutinación en el tubo Rh la sangre será de factor Rh negativo

GRUPO SANGUÍNEO
ANTISUEROS

ANTI A
ANTI B
ANTI AB
ANTI D
A
Aglutinación
No aglutinación
Aglutinación
No aglutinación
B
No aglutinación
Aglutinación
Aglutinación
No aglutinación
AB
Aglutinación
Aglutinación
Aglutinación
No aglutinación
O
No aglutinación
No aglutinación
No aglutinación
No aglutinación
D
No aglutinación
No aglutinación
No aglutinación
Aglutinación

 RESULTADOS.

              MUESTRA 1
              A Rh + (A Rh positivo)



                     MUESTRA 2
            A Rh + (A Rh positivo)



 


sábado, 6 de septiembre de 2014


TINCION DE WRIGHT


Solución colorante policromática para la tinción diferencial de la mayoría de las estructuras de sangre así como algunos de sus parásitos, por el método de Wright. Uso exclusivo de diagnóstico in vitro.


REACTIVOS.

1.- Colorante de Wright.
2.- Buffer de Fosfato.

PROCEDIMIENTO.

Se procede a realizar un frotis sanguíneo por medio de punción venosa.
Colocar la placa con la extensión hacia arriba en una gradilla de tinción.
La extensión se cubre con 1-2 ml del colorante durante 3 o 4 minutos.
Agregar suavemente Buffer de Fosfatos en la misma cantidad que el colorante y mezclar soplando sobre la superficie pero evitando derrames. Dejar de 8 a 10 minutos hasta que aparezca una escarcha metálica.
Quitar el colorante con agua destilada en forma horizontal, luego tomando la placa en forma vertical, continúe el lavado hasta que haya desaparecido toda la coloración azul.
Secar al aire en la posición vertical sobre papel absorbente.


RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS.

INTRODUCCION.

El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en el frotis teñido de sangre.
Al conocer la proporción de células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyético podría verse reflejado un cambio de la proporción de una especie celular. Para el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.
Hay varios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el más utilizado es el de almena y en línea.


MATERIAL Y REACTIVOS.
.-Frotis sanguíneo teñido.
.-Microscopio.
.-Aceite de inmersión.
.-Un contador de células.


PROCEDIMIENTO.

  1.   Se coloca el frotis en el microscopio y se enfoca.
  2.     Se le agrega una gota de aceite de inmersión y se observa con el objetivo de 100X hasta contar 100 leucocitos.
  3.    Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y los polimorfonucleares (neutrófilos,   basófilos y eosinofilos) según su morfología.
  4.     Se reportan en % (valor relativo) o en valor absoluto (mm3)



VALORES DE REFERENCIA.


ADULTOS
NIÑOS
LINFOCITOS
20-55%
20-50%
MONOCITOS
2-6%
0-9%
EOSINOFILOS
1-5%
0-8%
BASOFILOS
0-1%
0-1%
NEUTROFILOS
45-70%
20-60%
BANDAS
0-5%
1-6%

RESULTADOS:

LINFOCITOS: 47%
MONOCITOS: 3%
EOSINOFILOS: 3%
BASOFILOS: 0%
NEUTROFILOS: 64%
BANDAS: 2%